Trong sắc ký đồ HPLC có xảy ra hiện tượng peak âm trong giai đoạn đầu (thậm chí trong giai đoạn sau khi xuất hiện peak của chất cần tách). Hiện tượng này là do đâu? Cách khắc phục như thế nào? Mong nhận được ý kiến giúp đỡ của mọi người. Thân!
Đề tài Peak âm này xuất hiện đã khá lâu, với nhiều đề nghị trả lời. Rất vui khi bạn đã tin tưởng hai cao nhân của Bộ Môn Hóa Phân Tích :cuoi ( . Tại hạ là đệ tử của hai vị cao nhân ấy và vẫn đang chu du học hỏi thêm trên giang hồ :bachma ( . Nay thấy huynh đệ đồng môn thắc mắc về chiêu “Peak âm”, nên tại hạ xin chia sẻ cùng các huynh đệ. Muốn hiểu rõ chiêu này các huynh đệ phải hiểu về cấu trúc thiết bị, đặc biệt là cấu trúc và nguyên tắc hoạt động của đầu dò.
Đầu dò là thiết bị chuyển đổi “tính chất” hóa lý thành “tín hiệu” điện. (transducer)
Peak âm: nói cách khác, đó là sự giảm “tín hiệu” đường nền (baseline) trong một khoảng thời gian.
Ở đây, tín hiệu đường nền sinh ra bởi tín chất hóa lý của chất mang (tam gọi: M) (khí mang (carier) trong sắc ký khí và chất rửa giải (elution) trong sắc ký lỏng)
Nguyên nhân: “Peak âm” xuất hiện khi chất (tạm gọi: A) có tính chất hóa lý “yếu” (weak) hơn chất mang (M) đến đầu dò. Tín hiện điện sinh ra bởi chất A thấp hơn tín hiện điện sinh ra bởi chất mang M. Cụ thể trường hợp đầu dò UV, chất mang thông thường là dung môi có chỉ số hấp thu UV thấp (ví dụ giả thiết: MeOH cho tín hiệu điện trên đầu dò UV là 1mV). Khi bạn tiêm mẫu có chứa nước (H2O), trong cột sắc ký, nước được tách ra, độc lập đi đến đầu dò. Do H2O có chỉ số hấp thu UV thấp hơn MeOH (giả thiết: tín hiệu điện sinh ra trên đấu dò UV là 0,5mV). Vậy kết quả bạn sẽ có một peak âm trên săc ký đồ. Giải thích tương tự với đầu dò độ dẫn, điện hóa, FID, TCD, ECD…
Ngoài ra còn nguyên nhân do bạn dùng valve loop tiêm mẫu. Khi bạn chuyển từ vị trí “load” sang vị trí “inject”, do thiết kế không tốt (e.g. internal diameter of sample loop differs with that of conduct tube…), hiện tương sock áp suất có thể xảy ra, nó cũng tạo ra peak âm.
Peak âm chưa hẳn đã là xấu, thông thường nó xuất hiện rất sớm không ảnh hưởng tới kết quả phân tích. Hãy sống chung với peak âm như chúng ta đang sống chung với tà phái, khi nó không làm hại ta. Chỉ khi peak âm đứng quá gần peak cần phân tích, và khi peak phân tích của chúng ta hơi bị nhỏ. Hãy loại bỏ nó từ chính nguyên nhân mà nó sinh ra…Phải hiểu nó, không máy móc áp dụng! Thông thường trong sắc ky lỏng: “bác sĩ” khuyên dùng chất mang “elution” như là dung môi khi pha chất phân tích. Đọc kỹ hướng dẫn trước khi sử dụng. Chú ý khi thiết kế lắp đặt hệ thống sắc ký và đọc kỹ phần maintenance khi sử dụng… Trên đây là những chiêu đúc kết từ kinh nghiệm hành hiệp giang hồ của tại hạ. Các huynh đệ nếu có thêm chiêu thức nào xin mời thỉnh giáo! :cuoi ( Rất mong học hỏi thêm từ các bạn. Chúc vui.
hi em đang tìm hiểu về máy sắc kí khí, máy vừa nhận về, chuẩn bị chuyển giao công nghệ. vậy khi chuyển giao cần chú ý vấn đề gì,các thiết bị phụ trợ đi kèm cần chú ý điều gì, bao gồm những gi?
Chào NightWind ! Bạn có thể cho mình biết về đặc tính của cộ HPLC (C18, phenyl) được không vậy? Có cách nào nhận biết chất phân tích là phân cực hay không phân cực để ta chọn dung môi cho thích hợp, có 1 số chất khi chạy pha động có axit thì bị giữ trong cột rất lâu, vì sao? Cám ơn nhiều